野葛特异性PCR检测方法的建立与应用研究
Establishment and Application of a Specific PCR Assay for Pueraria lobata detection
投稿时间:2019-02-26  修订日期:2019-03-05
DOI:
中文关键词: 野葛  特异性PCR  查尔酮合成酶基因  成分鉴定
英文关键词: Pueraria  lobata, specific  PCR, chalcone  synthase gene, component  identification
基金项目:湖北省自然科学基金资助项目(2016CFB616);中南民族大学中央高校基本科研业务费专项资助项目(CZD18005);湖北省重点实验室建设基金(2018BFC360)。
作者单位E-mail
张丽 中南民族大学 生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室 lizhangst@163.com 
刘良科 怀化学院 生物与食品工程学院  
郑丽平 中南民族大学 生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室  
刘秤利 中南民族大学 生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室  
刘虹 中南民族大学 生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室  
覃瑞 中南民族大学 生命科学学院/武陵山区特色资源植物种质保护与利用湖北省重点实验室  
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中文摘要:
      一个物种特有的DNA序列可以开发成能够识别该物种及其加工产品的标记。为寻找野葛(Pueraria lobata)特有的DNA序列,建立野葛特异性PCR检测方法,本研究通过对GenBank中野葛基因信息的检索分析,筛选出同源序列少特异性强的野葛查耳酮合成酶基因作为研究对象。对该基因的特定区域设计引物,建立了野葛特异性定性PCR检测方法。利用该方法对野葛14个不同居群的DNA进行PCR扩增,均能扩增出226bp的片段。而用相同引物分别对20种其他植物的DNA进行扩增均未出现特异性扩增产物。PCR灵敏度实验结果表明该方法的检测灵敏度达到0.02 ng基因组DNA,对市场上的葛根产品进行检测结果表明该方法可以有效鉴定葛根产品中是否含有野葛成分。本研究建立的野葛特异性PCR检测方法特异性强、灵敏度高,可用于野葛成分的检测与鉴定。
英文摘要:
      A species-specific DNA sequence can be developed to identify the species and processed products derived from this species. In order to find out the unique DNA sequence of kudzu (Pueraria lobata), and establish a specific PCR assay for kudzu detection, the gene information of kudzu in GenBank were searched and analyzed by Blastn. The Kudzu chalcone synthase gene with less specific homologous sequences was selected as the research object. By designing primers for a specific region of this gene, a kudzu-specific qualitative PCR detection method was established. PCR amplification with DNA from 14 different kudzu populations could amplify the same 226 bp fragment. And no amplification was observed with DNA from 20 other plants. The sensitivity of this method was assessed to be 0.02 ng of kudzu genomic DNA.Kudzu-derived products test results showed that the method can identify whether the product contains kudzu component. In conclusion, this PCR method proved to have high specificity and sensitivity. It can be used for the detection and identification of Kudzu-derived products.
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